如何掃描出高質(zhì)量的數(shù)字病理切片操作指導原則

2021.2.23

目前許多基層醫(yī)院都購置了數(shù)字病理掃描儀（WSI掃描儀），但不是把病理切片放到WSI掃描儀上就自動地得到診斷質(zhì)量的數(shù)字切片圖像，掃描前的固定、染色等制片許多步驟會極大地影響隨后的掃描質(zhì)量，甚至導致掃描失敗，這與您使用什么品牌的掃描儀無關(guān)。你想從你的病理切片掃描出高質(zhì)量的圖像，以下注意事項可以幫助您使用好WSI掃描儀 ?

1. 組織準備高質(zhì)量制備的組織至關(guān)重要的，最好的數(shù)碼掃描儀也無法彌補樣本質(zhì)量差等不足。組織準備的多個步驟可能會影響最終的圖像掃描。

切片-WSI掃描儀的聚焦范圍比傳統(tǒng)顯微鏡小，標準組織厚度（3–5μm）將給出最佳結(jié)果。對于厚切片，可能需要進行多平面（z-stack）掃描。
染色-染色強度的控制至關(guān)重要，過深、過淺將使掃描儀更難自動識別組織，常常需要更多的人工操作。
貼片——與傳統(tǒng)顯微鏡一樣，數(shù)字WSI掃描儀在平的組織表面工作效果最好。盡最大努力避免組織折疊，才能對焦清晰。
蓋玻片-掃描切片，最好使用玻璃蓋玻片，塑料蓋玻片可能會隨著時間的推移而扭曲從而影響掃描儀的聚焦。與傳統(tǒng)顯微鏡一樣，確保蓋玻片下沒有氣泡，以防止掃描失焦。

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2. 切片檢查和準備

為了提高掃描的成功率和圖像質(zhì)量，請務(wù)必在掃描前檢查并清潔切片。
切片上的標簽、膠帶都有可能影響平整度妨礙掃描操作。用超細纖維擦鏡布小心地擦拭切片，可以有效地清除上下表面的灰塵、水漬或指紋。對于不易清除的污漬，用水或酒精溶液將其浸濕后再擦拭清潔。
檢查切片有無裂紋或缺口，尤其是切片的4個角處。任何松動的玻璃碎片都可能在掃描過程中脫落并損壞掃描機構(gòu)。
等到切片完全干燥后再裝入掃描儀，以免殘留液體進入掃描儀內(nèi)。
確保將切片平放在掃描儀機架或托盤中，并固定好。如果掃描過程中切片不平整，則很可能在掃描中出現(xiàn)大面積失焦區(qū)域。切片底部貼標簽可能導致切片放置不平整，請確保這些標簽僅粘貼到切片朝上那一面。。

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3. 掃描切片
每家WSI掃描儀都有自己的工作流程和要求。然而，為了掃描出好的圖像，還是有一些共同的原則要遵循：

掃描儀應能自動識別所有組織、鑒別所有的非組織物體如標簽，手工標注痕跡。組織染色過深、過淺、過多灰塵、手工標注痕跡都會影響組織區(qū)域的準確檢測。有可能的話，在高分辨率掃描之前，用制片質(zhì)量不佳切片的測試組織檢測，以避免以后需要重新掃描。
聚焦應該是自動的，并且預對焦的焦點應該均勻地分布在整個組織上。如果一個區(qū)域掃描時失焦，請嘗試手動在這個區(qū)域設(shè)置對焦點。
避免將焦點設(shè)置到蓋玻片上或下面有碎屑、氣泡或其他缺陷的區(qū)域。這些可能會導致掃描儀聚焦在不正確的掃描平面上，導致掃描失焦。
對于高倍率的油鏡掃描，確保在掃描前加了足夠的油，以防止掃描過程中物鏡變干，從而在掃描圖像上留下“條紋”偽影。同時也要防止過多的油會滲到蓋玻片下，在掃描時留下“光滑”的外觀，導致細胞邊緣的對比度變差。有經(jīng)驗的技術(shù)員正式油鏡掃描前的先進行一個快速的測試掃描會很有幫助。掃描結(jié)束后，一定要清理掉殘留油。

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4. 質(zhì)量控制（QC）
盡管做了很多努力，但也不能保證每次掃描結(jié)果都能接受。雖然每個實驗室的質(zhì)量控制過程都會有所不同，也應該始終遵循您所在機構(gòu)的質(zhì)量控制要求，不過，通過圖像查看器用以下方法，可以讓您快速和高效的進行QC。

先在低倍率（如4倍）下檢查整個數(shù)字切片，檢查是否有可見的失焦區(qū)域或錯位。
在高倍率、高分辨率圖像條件下，在組織切片的最寬處以單個水平路徑進行查看，一個個視野基層，主要檢查是否有細微的失焦或細微的錯位。在垂直方向上，從組織的最寬處邊緣到另一側(cè)邊緣，以一條完整的直線進行檢查，每次一個視野，主要看是否有任何失焦的區(qū)域。在高倍鏡下抽檢切片的幾個區(qū)域，特別是組織厚度不同或載玻片有缺陷的區(qū)域，這些區(qū)域是最有可能失焦的區(qū)域。

遵循這些簡單的指導原則，就能幫助您生成更高質(zhì)量的數(shù)字圖像，永久保存，隨時查看、共享和分析。
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