送樣指南|單細胞蛋白質(zhì)組學首關秘籍,請查收
單細胞蛋白質(zhì)組學(single-cell proteomics)是指在單個細胞水平上對其蛋白質(zhì)組進行定量和定性的分析技術,旨在研究單個細胞內(nèi)蛋白質(zhì)組成、變化及其翻譯后修飾。單細胞蛋白質(zhì)組學應用于多個領域,它能夠揭示同種細胞之間的異質(zhì)性,特別是在腫瘤研究中,幫助理解癌細胞的耐藥性、進展及其分子機制。此外,細胞蛋白質(zhì)組學可用于研究細胞發(fā)育與分化過程中蛋白質(zhì)表達的變化,從而深入探討細胞命運決定的分子機制。在疾病研究方面,通過分析患者或疾病模型中單個細胞的蛋白質(zhì)譜,揭示與疾病相關的關鍵分子機制,推動疾病的早期診斷與精準治療。免疫學領域也受益于單細胞蛋白質(zhì)組學,分析免疫細胞群體中的蛋白質(zhì)譜,從而探索免疫應答過程中的分子標志物和功能。傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)組學技術主要通過分析大規(guī)模樣本中的蛋白質(zhì)種類、表達水平和修飾等特征,提供關于細胞群體的總體信息,無法得到單個細胞的信息。在過去的十年中,單細胞RNA測序技術雖然在研究細胞異質(zhì)性方面取得了顯著進展,但由于轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的相關性較差,且RNA數(shù)據(jù)未能反映蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,單細胞蛋白質(zhì)組學則在揭示細胞內(nèi)實際功能表達方面顯示出了更大的潛力。
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基于Thermo最先進的Orbitrap Astral高分辨質(zhì)譜儀以及Bruker的timsTOF HT設備,百泰派克生物科技提供單細胞蛋白質(zhì)組學分析服務。百泰派克生物科技通過采用全流程集成自動化的單細胞分選平臺——CellenONE,搭建了尖端的單細胞蛋白質(zhì)組學分析平臺,能夠在高度異質(zhì)性的生物樣本中,實現(xiàn)精確、穩(wěn)定檢測與分析,滿足高靈敏度與高重復性的研究需求。
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樣本的質(zhì)量是單細胞蛋白質(zhì)組學實驗成功的關鍵一步,百泰派克生物科技為您提供了詳細的樣本采集與寄送指南以確保每一步操作都符合嚴格的標準,從而保證實驗數(shù)據(jù)的高質(zhì)量。請參考以下單細胞蛋白組送樣秘籍:
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一、新鮮血液樣本、培養(yǎng)細胞
1. 樣本量 :全血樣本使用EDTA抗凝管(紫色)收集,全血體積至少3mL;培養(yǎng)細胞置于培養(yǎng)基內(nèi),細胞量至少20萬個。新鮮血液樣本需要先分離得到關注的細胞(可再與業(yè)務員溝通),然后再放在保存液中保存。培養(yǎng)細胞離心去除培養(yǎng)液后,也放在培養(yǎng)液中保存(百泰派克提供)。保存條件:4℃或-20℃保存。
2. 運輸方式:放在泡沫盒中,運輸過程中避免劇烈震蕩。春秋季常溫運輸;在冬季,溫度極低(低于0℃) 的情況下,需要在樣本管的外壁包裹棉花或紗布,用于保溫;在夏季,溫度高(高于25℃) 的情況下,泡沫盒中置2-4個生物冰袋并利用防震袋或泡沫等將冰袋與樣本管隔開,保證樣本到公司不會被凍住。
3. 運輸時間:要求組織樣本在72h內(nèi)到公司。注:生物冰袋及棉花的是否添加及添加數(shù)量是天氣情況而定,原則上是保持樣本常溫運輸(保持在4-8℃),保證樣本既不會太熱也不會太冷被凍住。冰袋需是-20℃凍過的,一定不要用-80℃凍過的冰袋。
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二、新鮮單細胞懸液或原生質(zhì)體
1.細胞量:新鮮單細胞懸液或原生質(zhì)體可置于各自的培養(yǎng)基內(nèi),細胞量至少20萬個。 樣本管用封口膜封嚴。
2.運輸方式:將樣本放入合適的泡沫盒中,樣本盒放2-4個生物冰袋或適當體積的濕冰,將泡沫盒封好。運輸過程中避免劇烈震蕩。
3. 運輸時間:樣本需在2小時內(nèi)到達公司。
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三、新鮮動物組織樣本
1.?提前與百泰派克業(yè)務員聯(lián)系,獲取組織保存液(5mL/樣本)。
2. 切取約200mg的組織(黃豆粒大?。?/strong>。取樣時注意事項:盡量避免取到壞死、鈣化、硬化、纖維化的部位;如手術為電刀切割組織,去除因與電刀接觸的壞死組織;確保目標組織術時無冰凍。確保新鮮組織沒有真菌、細菌、支原體等的污染。
3. 將獲得的組織立即快速用PBS或生理鹽水洗掉組織表面的血液,消化系統(tǒng)組織需多次沖洗。
4. 將洗后的組織樣本盡快放入加滿組織保存液(百泰派克提供)的5mL離心管中,將離心管用封口膜密封好,管壁外圍添加填充介質(zhì),放入合適的泡沫盒中。
5. 若室外溫度較高,如夏季,可向泡沫盒中加適量生物冰袋;若室外溫度極低,如冬季,需在管子外壁添加棉花、紗布等保溫物質(zhì),將離心管置于泡沫盒中。
6. 聯(lián)系快遞公司郵寄。郵寄前請?zhí)崆奥?lián)系公司工作人員并隨時跟蹤貨物進展情況,以免樣本到達公司無人處理。要求組織樣本在72h內(nèi)到公司。
注:生物冰袋及棉花的是否添加及添加數(shù)量是天氣情況而定,原則上是保持樣本常溫運輸,保證樣本既不會太熱也不會太冷被凍住。冰袋需是-20℃凍過的,一定不要用-80℃ 凍過的冰袋。
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四、凍存細胞(細胞到公司后復蘇)
1. 細胞量:凍存細胞一般為凍存的PBMC、凍存的組織消化的原代細胞懸液,細胞量至少需要20萬個。
2. 準備流程:
(1)準備通用細胞凍存液,并將細胞凍存液完全融解并混勻。
(2)將需要凍存的細胞通過細胞計數(shù)儀計算出細胞總數(shù)。細胞的凍存密度一般為1×106個/ml。
(3)將細胞離心,棄上清,保留細胞沉淀。不同細胞類型的離心條件有差異。例如人PBMC細胞的離心條件是300g,5分鐘。
(4)根據(jù)細胞數(shù)量計算需加入的細胞凍存液體積,用移液槍吸取細胞凍存液并輕輕吹打重懸細胞。
(5)根據(jù)體積將上述細胞分裝至細胞凍存管中,并進行標記。注意:須使用專門用于液氮凍存的細胞凍存管,不可使用普通的離心管。
(6)將細胞凍存管放置于可逐步降低溫度的裝置,如程序性凍存盒內(nèi),再放入-80℃冰箱,確保溫度下降速度約為1℃/min,24小時后可進行運輸。
3. 運輸方式:干冰運輸。在郵寄前將凍存的樣本從凍存環(huán)境中取出并做好包裝,放入壁厚且質(zhì)量完好的泡沫盒中,樣本的上下和四周都用干冰填滿,將泡沫盒子封好后郵寄。
4. 運輸時間及干冰量:24小時內(nèi)能夠到達的,干冰重量不得低于5kg;48小時內(nèi)能夠到達的,干冰重量不得低于10kg;72小時內(nèi)能夠到達的,干冰重量不得低于15kg。
5. 聯(lián)系快遞公司郵寄。郵寄前請提前聯(lián)系公司工作人員并隨時跟蹤貨物進展情況,以免樣本到達公司無人處理。
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五、凍存組織(組織到公司后復蘇消化)
1.?提前與百泰派克業(yè)務員聯(lián)系,獲取組織凍存液(5mL/樣本)。
2. 取約500mg的組織(約3個黃豆粒大?。?/strong>。
取樣時注意事項:盡量避免取到壞死、鈣化、硬化、纖維化的部位;如手術為電刀切割組織,去除因與電刀接觸的壞死組織;確保目標組織術時無冰凍。確保新鮮組織沒有真菌、細菌、支原體等的污染。
3. 將獲得的組織立即快速用PBS或生理鹽水洗掉組織表面的血液,消化系統(tǒng)組織需多次沖洗。
4. 將清洗后的組織剪碎,轉(zhuǎn)移至加有百泰派克組織凍存液(百泰派克提供)的細胞凍存管中。注意:加入的凍存液體積視樣本量多少而定,建議樣本體積與組織凍存液 體積比例為1:10,例如100mg組織樣本對應加入約1ml組織凍存液。使用細胞凍存管,不可使用普通的離心管。
5. 將細胞凍存管放置于可逐步降低溫度的裝置,如程序性凍存盒內(nèi),再放入-80℃冰箱,確保溫度下降速度約為1℃/min,24 小時后可進行運輸。
6. 運輸方式:干冰運輸。適用的樣本管為細胞液氮凍存管。在郵寄前將凍存的樣本從凍存環(huán)境中取出并做好包裝,放入壁厚且質(zhì)量完好的泡沫盒中,樣本的上下和四周都用干冰填滿,將泡沫盒子封好后郵寄。
7. 運輸時間及干冰量:24小時內(nèi)能夠到達的,干冰重量不得低于5kg;48小時內(nèi)能夠到達的,干冰重量不得低于10kg;72小時內(nèi)能夠到達的,干冰重量不得低于15kg。
8. 聯(lián)系快遞公司郵寄。郵寄前請?zhí)崆奥?lián)系公司工作人員并隨時跟蹤貨物進展情況,以免樣本到達公司無人處理。
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六、新鮮的植物組織樣本
1. 組織質(zhì)量要要求:500mg以上。
2. 將組織置于原來的生長環(huán)境(培養(yǎng)基或土培等)或切取目標組織樣本,包裝后放入合適的泡沫盒中。
3. 若室外溫度較高,如夏季,可向泡沫盒中加適量生物冰袋;若室外溫度極低,如冬季,需在管子外壁添加棉花、紗布等保溫物質(zhì),將離心管置于泡沫盒中。
4. 聯(lián)系快遞公司郵寄。郵寄前請提前聯(lián)系公司工作人員并隨時跟蹤貨物進展情況,以免樣本到達公司無人處理。要求組織樣本在48h內(nèi)到公司。
注:生物冰袋及棉花的是否添加及添加數(shù)量是天氣情況而定,原則上是保持樣本常溫運輸,保證樣本既不會因為太熱腐爛也不會因為太冷被凍傷。冰袋需是-20°C凍過的,一定不要用-80°C凍過的冰袋。
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憑借專業(yè)的技術團隊和7大質(zhì)量控制檢測平臺,百泰派克生物科技致力于為研究人員提供先進的單細胞蛋白質(zhì)組學分析服務。百泰派克生物科技(BTP)采用ISO9001認證質(zhì)量控制體系管理實驗室,獲國家CNAS實驗室認可,在蛋白質(zhì)組學領域擁有多年服務經(jīng)驗,竭誠為您服務。我們期待與更多科研伙伴展開合作,共同推動這一前沿領域的發(fā)展,探索生命科學中的更多未知。
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1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,專業(yè)提供以質(zhì)譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務;
3.業(yè)務范圍覆蓋蛋白質(zhì)組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等;
4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業(yè),10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務!
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